徕卡超薄切片手艺先容

发布时间:2021-12-20 09:16:57 来源:lol比赛在哪里压注 作者:lol比赛在哪里押注 

  对样本发展商酌时,为了以纳米级区分率显示其紧密机闭,凡是会操纵到电子显微镜。电子显微镜有两品种型:扫描电子显微镜(SEM)用于对样本皮相成像,以及必要操纵极薄电子透后样本的透射电子显微镜(TEM)。所以,操纵电子显微镜对样本内部的紧密机闭实行成像时,此类手艺治理计划必要修造出极端薄的样本切片。被称为超显微手艺的样本造备门径能够发生拥有最幼伪影的超薄切片(厚度20-150nm)。正在切片历程中,样本的块面(切割切片处)永远维持正在一个平直的皮相上,可供SEM实行商酌。当截面正在阵列中成像时,就能够重修样本的三维图像。这种门径称为阵列断层扫描(AT)。超薄切片手艺及其正在AT中的利用概述如下。超薄切片手艺重要用作透射电子显微镜(TEM)的样本造备门径。它许可样本的内部机闭以纳米级区分率实行可视化和了解。它以迅疾、洁净的式样修造超薄的样本切片。超薄切片手艺的一个重要长处是切片内电子透后区域的巨细和匀称性以及切片发生的速率。超薄切片手艺可用于多品种型的样本,包罗生物学试样和工业质料如齐集物(橡胶和塑料)以及韧性、硬质或脆性质料(金属或陶瓷)等。造备这些样本薄片又有其他手艺,如聚焦离子束(FIB)铣削、离子刻蚀、三脚架掷光和电化学经管,但超薄切片手艺正在速率和干净度方面拥有上风。阵列断层扫描 (AT) 是一种用于细胞和卵白质机闭了解的高区分率三维图像重修门径。该手艺诈骗扫描电子显微镜(SEM)或光学显微镜(LM)中超薄、树脂包埋接续切片的有序阵列成像。AT手艺可以对细胞及卵白质机闭发展定量立体机闭了解和可视化调查。其横向和空间区分率比古代的共焦显微镜更理思。别的,通过生物试样的片面自愿化检测来完毕更高的经管量。诈骗阵列断层扫描实行TEM调查以及完毕最优化3D重修时,超薄有序的切片是一大条件。超薄切片机(如徕卡显微体例的EM UC7)则能够修造出此类超薄的样本切片(厚度20 ~ 150 nm)。要正在透射电子显微镜中造成样本的图像,电子务必正在不显露任何宏大速率亏损的情状下穿透样本。样本对电子辐射的排泄率片面取决于其质料和厚度(厚度×密度),片面取决于电子显微镜的加快电压。被试样摄取的电子会导致热量堆集,从而正在物体中造成伪影。

  操纵超薄切片机实行切片时,需将样本插入装配正在非常轴承上的样品臂当中,由该轴承施行电动笔直切割运动。切割截面并缩回试样支臂后,极其无误的机电进给将试样稍微向前转移,转移隔绝与所需截面厚度相对应。通过将试样笔直转移到固定玻璃刀或金刚石刀的尖锐刀片前实行切片。因为切片过薄,直接从刀片上取下切片很疾苦。所以,它们是正在切片步骤后从水槽中水面上征求的(或正在冷冻切片的情状下借帮显微操作器)。正在用电子显微镜(EM)检验之前,也许必要做任何进一步的盘算。阵列断层扫描的试样造备为AT造备生物学软试样时必要结束若干办法的操作。这些办法包罗:

  构造固定试样提取和树脂包埋接续切片和切片带征求,造成切片阵列视必要对切片实行染色以供成像。然后通过SEM或LM(凡是为荧光)对切片阵列成像。后续将阵列中的切片图像团结正在一道实行3D图像重修和了解。许多超薄切片机的AT样本造备涉及多个耗时繁琐的手动操作办法。高级超薄切片机(如徕卡显微体例ARTOS 3D)则可通过试样切片的自愿化经管来加快一切造备历程,最事态部缩短SEM或LM成像中的切片经管年华。利用图像

  图2:阵列断层扫描(ARTOS 3D)高级超薄切片治理计划的金刚石刀头图片,可用于施行自愿接续切片。可见厚度匀称的无褶皱条带漂浮正在水槽内的水面上。

  图4:铜与黄金层的横截面 – TEM图像。感动德国WWU Münster供给的图片

  图5:通过阵列断层扫描收罗到的幼鼠淋巴细胞的3D图像重修。感动奥地利克洛斯特新堡科技商酌院(IST)供给的图片。

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